Sát Thủ Đối Đầu kể về Ladybug (Brad Pitt) là một sát thủ lành nghề vừa trở lại sau khoảng thời gian nghỉ hưu. Anh nhận nhiệm vụ từ sát thủ Maria Beetle (Sandra Bullock) là thu hồi chiếc vali trên chuyến tàu cao tốc ở Nhật Bản. Những tưởng đây sẽ là phi vụ dễ ăn thì một loạt biến cố ập đến. Ladybug phải đối mặt với vô số thế lực khác nhau trên chiếc tàu hỏa cùng nhắm vào chiếc vali kia. Đối thủ của anh lần lượt là Lemon (Brian Tyree Henry), Kimura (Andrew Koji), Hornet, Prince (Joey King) và Tangerine (Aaron Taylor Johnson). Mỗi người đều có những âm mưu và cách thức hoạt động riêng dẫn đến một cục diện vô cùng rối ren.